食品中四種甜味劑的測(cè)定方法液相色譜法

1 范圍

本標(biāo)準(zhǔn)參照DB13/T 1112-2009規(guī)定了食品中乙酞磺胺酸鉀，糖精鈉，環(huán)己基氨基磺酸鈉，阿斯巴甜的測(cè)定方法。本標(biāo)準(zhǔn)適用于飲料中乙酞磺胺酸鉀，糖精鈉，環(huán)己基氨基磺酸鈉，阿斯巴甜的測(cè)定。本方法乙酞磺胺酸鉀的檢出限為0.05ug/mL；糖精鈉的檢出限為0.05ug/mL；環(huán)己基氨基磺酸鈉的檢出限為2.0ug/mL；阿斯巴甜的檢出限為0.05ug/mL;

2 規(guī)范性引用文件

下列文件中的條款通過(guò)本標(biāo)準(zhǔn)的引用而成為本標(biāo)準(zhǔn)的條款。凡是注日期的引用文件，其隨后所有的修改單（不包括勘誤的內(nèi)容）或修訂版均不適用于本標(biāo)準(zhǔn)，然而，鼓勵(lì)根據(jù)本標(biāo)準(zhǔn)達(dá)成協(xié)議的各方研究是否可使用這些文件的版本。凡是不注日期的引用文件，其版本適用于本標(biāo)準(zhǔn)。

GB/T6682分析實(shí)驗(yàn)用水規(guī)格和試驗(yàn)方法

3 原理

樣品中甜味劑在酸性溶液中以陰離子形式，選用含有類離子對(duì)試劑（tris)的甲醇水溶液作流動(dòng)相，采用反相離子對(duì)液相色譜法分離，根據(jù)色譜峰的保留時(shí)間定性，根據(jù)峰高或峰面積定量。

4 試劑

除另有規(guī)定，所有試劑均為分析純，為GB/T6682規(guī)定的一級(jí)水。

4.1甲醇：色譜純。

4.2稀氨水（(1+1):氨水加水等體積混合。

4. 3 Tris儲(chǔ)備液（(0. 5mol/L）：稱取6.057g三（羥甲基）氨基甲烷溶于超純水中定容到100mL,混合均勻。

4.4乙酞磺胺酸鉀，糖精鈉，環(huán)己基氨基磺酸鈉，阿斯巴甜標(biāo)準(zhǔn)品：純度≥99%。

4.5乙酞磺胺酸鉀，糖精鈉，環(huán)己基氨基磺酸鈉，阿斯巴甜標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備溶液：精密秤取乙酞磺胺酸鉀、糖精鈉各0.1000g，用超純水溶解稀釋至10mL；環(huán)己基氨基磺酸鈉1.0000g，用超純水溶解稀釋至10mL；阿斯巴甜0.1000g用1:1甲醇水溶液溶解稀釋至10mL；阿斯巴甜、乙酞磺胺酸鉀、糖精鈉濃度分別為：10.0mg/mL；環(huán)己基氨基磺酸鈉濃度為：100.0mg/mL：于冰箱保存。

4.6混合標(biāo)準(zhǔn)使用溶液：取一定量上述標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液混合，用超純水逐級(jí)稀釋，配成乙酞磺胺酸鉀，糖精鈉，阿斯巴甜為1.0mg/mL的混合標(biāo)準(zhǔn)使用液，環(huán)己基氨基磺酸鈉濃度為10.Omg/mL的標(biāo)準(zhǔn)使用液。

4. 7混合標(biāo)準(zhǔn)使用系列溶液：準(zhǔn)確吸取混合標(biāo)準(zhǔn)使用液0. 00mL, 0. 05mL, 0. 10mL, 0. 20mL, 0. 40mL, 0. 60mL，環(huán)己基氨基磺酸鈉標(biāo)準(zhǔn)使用液0. 00mL, 0. 10mL, 0. 50mL, 1. 0mL, 2. 0mL, 4. 0mL加超純水定容至10mL，配成標(biāo)準(zhǔn)系列。其中，乙酞磺胺酸鉀、阿斯巴甜、糖精鈉其濃度為0.0ug/mL,5.0ug/mL, 10.0ug/mL, 20.0ug/mL, 40.0ug/mL, 60.0ug/mL，環(huán)己基氨基磺酸鈉濃度0.0mg/mL,0.1mg/mL,0.5mg/mL,1.0mg/mL,2.0mg/mL,4.0mg/mL，置于冰箱冷藏保存。

5 儀器

5.1液相色譜儀（501液相色譜儀），UV-501紫外檢測(cè)器。

5.2超聲波清洗器、AP-01無(wú)油真空泵。

5.3離心機(jī)。

5.4抽濾瓶。

5. 5微孔濾膜：0.45nm。

5.6電子天平：感量0.0001g和0.01 g。

6 分析步驟

6.1樣品處理：

稱取5.0g-10.0g（到0.01g)試樣，用氨水（1+1)調(diào)pH至7，加水定容至適當(dāng)體積，離

心沉淀，上清液經(jīng)45u m濾膜過(guò)濾，濾液作HPLC分析用。

6. 2測(cè)定

6.2.1 HPLC參考條件

分析柱：VertexC18色譜柱，4.6mmx250mm粒度5um

流動(dòng)相：甲醇：5mmol/LTris緩沖溶液（pH4.5）=5: 95。

波長(zhǎng)：205nm。

流速：1.2 mL/min。

柱溫：25℃

6.2.2標(biāo)準(zhǔn)曲線：分別進(jìn)樣阿斯巴甜、乙酞磺胺酸鉀、糖精鈉和環(huán)己基氨基磺酸鈉標(biāo)準(zhǔn)系列溶液各10uL，進(jìn)行HPLC分析，然后以峰面積為縱坐標(biāo)，以四種甜味劑的含量為橫坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。

6.2.3試樣測(cè)定：吸取6.1處理后的試樣溶液10uL進(jìn)行HPLC分析，測(cè)定其峰面積，從標(biāo)準(zhǔn)曲線查得測(cè)定液中四種甜味劑的含量

7 結(jié)果計(jì)算

試樣中甜味劑成分的含量按下式計(jì)算：

X=cxVxl000/m x 1000

式中：

X-試樣中甜味劑成分的含量，單位為毫克每千克（mg/kg);

c-由標(biāo)準(zhǔn)曲線上查得進(jìn)樣液中甜味劑成分的量，單位為微克每毫升(ug/mL);

V-試樣稀釋液總體積，單位為毫升（mL);

m-試樣質(zhì)量，單位為克（g)

計(jì)算結(jié)果保留兩位有效數(shù)字。

8 精密度

在重復(fù)性條件下獲得的兩次獨(dú)立測(cè)定結(jié)果的差值不得超過(guò)算術(shù)平均值的10%.

1．乙酞磺胺酸鉀（acesulfame-K);

2．阿斯巴甜(aspartame) ;

3．環(huán)己基氨基磺酸鈉（sodiumcyclamate) ;

4.糖精鈉（sodiumsaccharina)